細胞趨化實(shí)驗的工作流程

步驟

使用ibidi µ-Slide Chemotaxis細胞趨化載玻片，可以進(jìn)行具有定義的趨化梯度的可重現的趨化性測定。

首先，細胞接種，這可以在2D或3D環(huán)境中完成。孵育和細胞附著(zhù)后，根據確定的加載方案，用趨化劑填充滿(mǎn)每個(gè)腔室的兩個(gè)儲液池。

ibidi 的解決方案

µ-Slide Chemotaxis 包含3個(gè)獨立的腔室，用于使用緩慢或快速遷移的細胞進(jìn)行平行趨化性測定。

它允許在可重現的環(huán)境中創(chuàng )建精確定義的、穩定的趨化梯度。

步驟

生理條件下的活細胞成像能夠詳細記錄細胞隨時(shí)間的遷移，這是正確分析趨化性測定所必需的過(guò)程。

成像周期的持續時(shí)間取決于細胞類(lèi)型（例如，快速遷移的白細胞或緩慢遷移的腫瘤細胞或成纖維細胞）和環(huán)境條件（例如，趨化劑的類(lèi)型和濃度）。用于緩慢遷移細胞的典型視頻顯微鏡設置包括在24小時(shí)內每 2.5-10分鐘拍攝一張照片。

由于每個(gè)實(shí)驗最佳地包含來(lái)自20-40個(gè)單細胞的跟蹤數據，因此應使用低倍顯微鏡物鏡，例如4倍或10倍。

MDA-MB-231 人乳腺癌細胞在膠原凝膠中遷移的延時(shí)顯微成像。在 µ-Slide Chemotaxis 中以 EGF 作為趨化劑觀(guān)察細胞 24小時(shí)。生理條件由ibidi加熱和氣體培養系統維持。

ibidi的解決方案

ibidi Stage Top Incubators ibidi加熱和氣體培養系統提供顯微鏡下的生理環(huán)境，可在短期和長(cháng)期趨化性測定期間實(shí)現活細胞成像。

步驟

通常趨化性測定的活細胞顯微鏡檢查會(huì )創(chuàng )建時(shí)間圖像堆棧，其中每個(gè)圖像顯示特定時(shí)間點(diǎn)的確切細胞位置。

為了量化它們的運動(dòng)，通過(guò)確定它們在圖像堆棧的每一幀上的位置來(lái)跟蹤單個(gè)細胞。跟蹤可以手動(dòng)完成，也可以使用特殊軟件自動(dòng)完成。之后，每個(gè)跟蹤單元格 (x, y)的位置值可用于每個(gè)時(shí)間點(diǎn)(t)并可以進(jìn)一步分析。

使用ImageJ手動(dòng)跟蹤插件跟蹤后的細胞跟蹤可視化。

跟蹤后ImageJ手動(dòng)跟蹤插件的輸出；具有每個(gè)時(shí)間點(diǎn)（t）的每個(gè)被跟蹤單元（x，y）的位置值的數據表。

ibidi的解決方案

自動(dòng)跟蹤和數據分析：

MetaVi Labs的Chemotaxis FastTrack AI Image Analysis圖像分析是一種基于A(yíng)I的自動(dòng)圖像分析解決方案，用于趨化性測定?；诰W(wǎng)絡(luò )的軟件將快速而強大的細胞跟蹤與人工智能 (AI) 相結合，無(wú)需標記即可進(jìn)行客觀(guān)且可重復的分析。只需將您的數據上傳到您的FastTrack AI帳戶(hù)，即可開(kāi)始分析工作。在1到2小時(shí)內，您將收到一份詳細的報告供下載和進(jìn)一步評估。

手動(dòng)跟蹤：

ImageJ手動(dòng)跟蹤插件有助于在趨化性測定中手動(dòng)跟蹤細胞遷移。