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組織研磨機對酵母菌研磨破壁方法

更新時(shí)間:2018-06-28   點(diǎn)擊次數:3391次

組織研磨機對酵母菌研磨破壁方法


實(shí)驗目的
       對大量和小量酵母菌分別進(jìn)行研磨,進(jìn)而提取其核酸或蛋白。
 
實(shí)驗原理
       通過(guò)研磨珠的撞擊,充分破碎酵母菌細胞壁,使其內容物流出,進(jìn)而提取目標成分。
 
實(shí)驗材料和器具
樣品:酵母菌
儀器:全自動(dòng)樣品冷凍研磨儀(上海凈信,Tissuelyser-24)
耗材:離心管,不銹鋼研磨珠(上海凈信,中號研磨珠)
 
實(shí)驗步驟
方法1  大量酵母菌的研磨方法
1.1 預處理研磨罐和研磨珠,然后放入液氮中冷卻待用。
1.2 把酵母菌樣本一顆一顆滴到干凈的液氮中,使樣本單個(gè)個(gè)體呈黃豆粒大??;
1.3 用鑷子把這一顆顆如黃豆大小的酵母菌團夾到一個(gè)干凈的燒杯或者其他容器內;
1.4 把1.3中樣本一起倒入冷凍待用的研磨罐中,加入一顆中號珠子,不用太大也可;
1.5 把裝好樣本的研磨罐裝入凈信全自動(dòng)樣品研磨機上,設置頻率11單位頻振,20s,分5-6次研磨,每次間隔都把研磨罐放入液氮中冷卻;
1.6 根據實(shí)驗需求進(jìn)行后續實(shí)驗。
 
方法2  少量酵母菌的研磨方法
2.1 直接把樣本加入裝有半管玻璃細珠的離心管中;
2.2 把裝好樣本的離心管放入凈信全自動(dòng)樣本研磨機上,頻率13單位頻振下研磨30s,休息10s,再在頻率13單位頻振下研磨30s,切勿連續研磨60s,否則導致升溫將影響提取效果;
2.3 把研磨好的樣本直接加入提取液,繼續后續實(shí)驗。
 
實(shí)驗注意事項
1.少量酵母菌研磨好后,實(shí)驗室需要檢驗離心管中酵母是否研磨達到要求,可以采用重疊離心管離心方法:具體步驟為,取一管研磨好裝有酵母的離心管,在底部用針或者其他尖銳東西扎一小孔,再在該離心管底部套一新離心管,一起離心。zui后將新離心管中得到的酵母液進(jìn)行鏡檢,若鏡檢無(wú)完整酵母細胞,則研磨效果達到要求。
2.如果上述步驟檢測效果不理想,可以在*步裝樣本前,先把酵母樣本放入離心機,稍微離心,去除上浮液,再繼續實(shí)驗。

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