組織研磨機對酵母菌研磨破壁方法

組織研磨機對酵母菌研磨破壁方法

實(shí)驗目的
       對大量和小量酵母菌分別進(jìn)行研磨，進(jìn)而提取其核酸或蛋白。
 
實(shí)驗原理
       通過(guò)研磨珠的撞擊，充分破碎酵母菌細胞壁，使其內容物流出，進(jìn)而提取目標成分。
 
實(shí)驗材料和器具
樣品：酵母菌
儀器：全自動(dòng)樣品冷凍研磨儀（上海凈信，Tissuelyser-24）
耗材：離心管，不銹鋼研磨珠（上海凈信，中號研磨珠）
 
實(shí)驗步驟
方法1  大量酵母菌的研磨方法
1.1 預處理研磨罐和研磨珠，然后放入液氮中冷卻待用。
1.2 把酵母菌樣本一顆一顆滴到干凈的液氮中，使樣本單個(gè)個(gè)體呈黃豆粒大??；
1.3 用鑷子把這一顆顆如黃豆大小的酵母菌團夾到一個(gè)干凈的燒杯或者其他容器內；
1.4 把1.3中樣本一起倒入冷凍待用的研磨罐中，加入一顆中號珠子，不用太大也可；
1.5 把裝好樣本的研磨罐裝入凈信全自動(dòng)樣品研磨機上，設置頻率11單位頻振，20s，分5-6次研磨，每次間隔都把研磨罐放入液氮中冷卻；
1.6 根據實(shí)驗需求進(jìn)行后續實(shí)驗。
 
方法2  少量酵母菌的研磨方法
2.1 直接把樣本加入裝有半管玻璃細珠的離心管中；
2.2 把裝好樣本的離心管放入凈信全自動(dòng)樣本研磨機上，頻率13單位頻振下研磨30s，休息10s，再在頻率13單位頻振下研磨30s，切勿連續研磨60s，否則導致升溫將影響提取效果；
2.3 把研磨好的樣本直接加入提取液，繼續后續實(shí)驗。
 
實(shí)驗注意事項
1.少量酵母菌研磨好后，實(shí)驗室需要檢驗離心管中酵母是否研磨達到要求，可以采用重疊離心管離心方法：具體步驟為，取一管研磨好裝有酵母的離心管，在底部用針或者其他尖銳東西扎一小孔，再在該離心管底部套一新離心管，一起離心。zui后將新離心管中得到的酵母液進(jìn)行鏡檢，若鏡檢無(wú)完整酵母細胞，則研磨效果達到要求。
2.如果上述步驟檢測效果不理想，可以在*步裝樣本前，先把酵母樣本放入離心機，稍微離心，去除上浮液，再繼續實(shí)驗。