組織研磨機對擬南芥或水稻穗RNA的快速提取步驟
實(shí)驗步驟
方法1 濕磨法
1.取打碎機適配器于-80°冷凍約15min。
2.取一指節長(cháng)度的花序,帶上一片葉子,(材料量可多可少,7d大小的苗地上部分也能提出RNA),放入國產(chǎn)2ml EP管中,加一粒鋼珠,液氮速凍。之后用鑷子取出,快速加入適配器中。(用國產(chǎn)的EP管即可,進(jìn)口的管子液氮凍過(guò)后,容易裂)
3.打碎15s,10單位頻振。(水稻嫩葉為。45S,12單位頻振 老葉為,70S 12單位頻振 )
4.將材料再次放入液氮中。
5.用磁鐵吸出鋼珠,加入1研磨單位Trizol,余下步驟即正常的RNA提取步驟。
方法2 干磨法
1.取一指節長(cháng)度的花序(材料量可多可少,7d大小的苗地上部分也能提出RNA),放入國產(chǎn)2研磨單位EP管中,加一粒鋼珠,400ul Trizol。
2.打碎1min 10單位頻振(水稻嫩葉為。45S,2單位頻振 老葉為,70S 2單位頻振 ) 。
3.吸出鋼珠,補0.12mlTrizol。
4.余下步驟即正常的RNA提取步驟。