高通量組織研磨儀在低溫破碎酵母細胞中的使用說(shuō)明

條形酵母是將酵母通過(guò)小孔注入到裝有液體氮的氣罐中壓縮制成的。將有1mm的篩子扣入到裝有10-20 ml球狀酵母的50ml破碎罐的頂部，經(jīng)過(guò)離心破碎變成了2L的條狀物。壓力是由人工用60ml的自由活塞注射器注入罐內，條狀可以在-80C°下被保存。
        使用上海凈信Tissuelyser全自動(dòng)樣品快速研磨儀對酵母進(jìn)行研磨，將不銹鋼鋼珠和樣本分別裝入研磨鋼罐中，然后放入到用聚苯乙烯盒子盛放的液氮中，當預冷凍過(guò)程結束后，時(shí)間一分鐘左右，或者直到原來(lái)沸騰的液體氮恢復平靜，將破碎罐從液氮中取出，并要將破碎罐沾有的液體全部清理干凈，以避免在破碎過(guò)程中發(fā)生爆炸。研磨鋼罐用坩堝鉗或大鑷子夾取出來(lái)，而且通常要帶經(jīng)過(guò)冷凍的手套，凍傷以免。
       研磨鋼罐中酵母量不要太多，否則可能會(huì )研磨不充分，留有殘渣，一般為研磨鋼罐的1/3左右為宜，把剛從液氮中取出的鋼罐安裝在凈信Tissuelyser全自動(dòng)樣本快速研磨儀中，分5次進(jìn)行研磨，設置頻率55hz，20s，每次間隔都把研磨罐放入液氮中冷卻。
       在每次破碎后都要將破碎罐取下，放入到液氮中進(jìn)行冷凍，當液氮不在沸騰時(shí)，可以將鋼罐取出，破碎可以繼續進(jìn)行。
       經(jīng)過(guò)100秒的破碎后，我們通過(guò)顯微鏡觀(guān)察可以發(fā)現95%的酵母已經(jīng)達到破碎效果，用于下一步的實(shí)驗過(guò)程。剩余的酵母可以?xún)Υ?，備用?/span>
       研磨鋼罐和鋼珠都可重復利用，破碎罐和破碎球可以用溫的乙醇清洗，放到干燥處貯存。